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| 慢病毒的浓缩与纯化方法有哪些呢

时间 11/2/2023 9:30:25 AM

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作者 博奥龙(Biodragon)

       方法一超速离心沉淀法
 
  1.取6个Ultra-clear SW28离心管,用70%乙醇消毒后,放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。
 
  2.每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。
 
  3.取一支10ml的移液管,吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部,缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地,将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管,对剩下3管进行同样处理。
 
  4.用PBS调整各管的重量,使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。
 
  5.按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28超速离心转头中。
 
  6.4℃,25,000 rpm.(82,700g)离心2小时。
 
  7.小心将管子从转头中取出。倒掉上清,将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。
 
  8.每管中加入100ml不含钙和镁的PBS洗下沉淀。
 
  9.将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中,盖上盖子。
 
  10.在4℃溶解2小时,每隔20分钟轻轻震荡。
 
  11.4℃,500g离心1分钟,使溶液集中于管底。
 
  12.用200μl移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。
 
  13.集中后的病毒悬液分装成50μl每份,保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80℃。
 
  方法二PEG-8000浓缩法
 
  1.5X PEG8000+NaCl配制称取NaCl 8.766 g;PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中;121摄氏度30min湿热灭绝30min;保存在4℃。
 
  2.使用0.45μm滤头过滤慢病毒上清液;
 
  3.每30ml过滤后的病毒初始液,加入5X PEG-8000+NaCl母液7.5 ml;
 
  4.每20~30min混合一次,共进行3-5次;
 
  5.4度放置过夜;
 
  6.4度,4000 g,离心20min;
 
  7.吸弃上清,静置管子1~2分钟,吸走残余液体;
 
  8.加入适量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀;
 
  9.集中后的病毒悬液分装成50μl每份,保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80℃