慢病毒的浓缩与纯化方法有哪些呢

       方法一超速离心沉淀法
 
　　1.取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。
 
　　2.每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。
 
　　3.取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。
 
　　4.用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。
 
　　5.按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28超速离心转头中。
 
　　6.4℃，25，000 rpm.(82，700g)离心2小时。
 
　　7.小心将管子从转头中取出。倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。
 
　　8.每管中加入100ml不含钙和镁的PBS洗下沉淀。
 
　　9.将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中，盖上盖子。
 
　　10.在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡。
 
　　11.4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底。
 
　　12.用200μl移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。
 
　　13.集中后的病毒悬液分装成50μl每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80℃。
 
　　方法二PEG-8000浓缩法
 
　　1.5X PEG8000+NaCl配制称取NaCl 8.766 g;PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中；121摄氏度30min湿热灭绝30min；保存在4℃。
 
　　2.使用0.45μm滤头过滤慢病毒上清液；
 
　　3.每30ml过滤后的病毒初始液，加入5X PEG-8000+NaCl母液7.5 ml；
 
　　4.每20～30min混合一次，共进行3-5次；
 
　　5.4度放置过夜；
 
　　6.4度，4000 g，离心20min；
 
　　7.吸弃上清，静置管子1～2分钟，吸走残余液体；
 
　　8.加入适量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀；
 
　　9.集中后的病毒悬液分装成50μl每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80℃