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免疫组化常见问题之对照/标本无染色

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时间:2022-11-23    浏览:   【 打印此页】  【 关闭


1、确认是否忽略了应该加的某种试剂,包括一抗、二抗、三抗及底物等。
2、确认所有的试剂是否按正确的顺序加入,是否孵育了足够的时间。
3、对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体,以及所用的检测系统是否和一抗匹配,这一点是非常重要的。比如,如果一抗是兔来源的抗体,二抗一定要用抗兔的二抗来匹配;或一抗是小鼠的 IgM 一抗,二抗必须是山羊/兔抗小鼠的 IgM(不是 IgG)二抗。
4、检查抗体所使用的稀释度及稀释溶液。
5、检查抗体的有效期和保存条件,尤其是标记了酶或荧光素的抗体,现在大多数试剂公司的抗体均要求在 4~8℃条件下保存,应避免反复冻融,试剂保存时一定要避免与挥发性有机溶剂同放一室,以免降低抗体的效价。
6、检查标本的储存条件,最好用已知阳性的标本来同时做阳性对照。
7、检查色原/底物溶液,最简单的检测方法是将一滴标记有酶的抗体加入到制备好的底物溶液中,如果底物发生预期的颜色变化,则可排除底物的因素。需要注意的是,有些底物在制成工作液后应在一定时间内用完,否则会失效。
8、检查冲洗液是否和反应试剂匹配,溶液的 pH 值很重要,与过氧化物酶底物匹配的溶液中不应含有叠氮钠。
9、检查复染剂和封片剂是否和所使用的色原匹配。
 

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