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北京博奥龙:胎牛血清制备、购买和使用过程中需要注意什么?​‍
时间:2019-05-29    浏览:   【 打印此页】  【 关闭


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什么是胎牛血清?

胎牛血清是一种来自剖腹产的胎牛的血清,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少,其性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。
 

胎牛血清功能有哪些?

牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。

1、提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。

2、 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。

3、.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属热原质结合,起到解毒作用。

4、是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

5、.起酸碱度缓冲液作用。

6、提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。

 

如何成功制备胎牛血清?

具体胎牛血清制备操作方法如下:

第一步、血液采集

1、挑选出大约8月龄以上的健康妊娠母牛,经剖腹获取小牛。

2、将小牛清洗干净后,侧放在万级洁净房间内的采血台上,固定四肢及头部。

3、用来苏水清洗心脏外部,刮去心脏外部牛毛,露出心脏外部一侧皮肤,用2%碘酒擦拭消毒。

4、在心脏部位切开一道10厘米左右的切口,取出近心血管,先用2%碘酒消毒,再用75%的酒精消毒,用止血钳夹住血管,切开1厘米左右的切口进行插管,插好管后打开血管的止血钳,让牛血顺采血管流入另一个洁净房间内的采血瓶中。

5、采血瓶采血前经干烤灭菌(180℃ 2小时)后,按无菌操作注入10毫升左右经高压灭菌的生理盐水后加塞封口,于采血前半小时放入37℃恒温箱备用。采血前先晃动瓶内生理盐水,使其充分湿润瓶壁后倒出,再进行采血并加塞封口。将采血后的采血瓶放37℃ 恒温室2小时,再放入4℃冷库 4小时以备离心。

第二步、离心

将准备好的采血瓶放入离心套筒调好平衡后,对称放入离心机,按1800转/分钟 离心50分钟后,放入4℃冷库备用。

第三步、抽血清

取出4℃冷库离心好的采血瓶,注意轻抬轻放,以免将下层血块和血清混层。将经过高压灭菌装有两孔瓶塞的5000ml大瓶的抽气孔一端的管子接好空气滤器,再接到压缩机抽气口上。打开压缩机,用抽血清孔的管子轻轻抽取采血瓶内的上清液,注意控制好抽管,避免抽到下层血块。将抽好的血清分装,即为粗制胎牛血清,放入-20℃冷库冷藏备用。

第四步、血清过滤

1、将-20℃冷库内的粗制血清取出化冻。

2、将化冻后的粗制血清用经过高压灭菌的12层医用脱脂棉纱布进行初滤。

3、把初滤后的血清倒入大罐进行混合。

4、将装好滤芯的滤器做密封性试验和发泡试验合格后,经过高压灭菌,在洁净室内用无菌操作法将滤器按滤柱孔径由大到小的顺序进行组装,并装上压力表。把滤器大孔径一端和蠕动泵出口进行连接。

5、用蠕动泵将大罐内的血清送入滤器进行过滤。

6、将滤出的血清在百级净化操作台上进行分装后,即为精制胎牛血清,送-20℃冷库储存。

如何购买合格的胎牛血清?

1、生产是否合规,合格的胎牛血清生产厂家,一般需要获得《牛血清生产企业达标合格证书》等类似证明,以保证其采血、混匀、过滤、灌装等环节,严格执行GMP管理规范,全流程可追溯。

2、质量如何验证,合格的胎牛血清,必须要通过严格的质量检测,保证其低内毒素、低抗体、无噬菌体、无支原体、无抗生素残留等。若出厂进行过细胞培养综合评价、后续应用实验验证,则更具有质量保证。

3、来源地是哪里,从源头控制胎牛血清的质量,好的胎牛血清一定依赖优质的原料,产地可以选择能提供优质的牧草、干净的水源、广阔的空间,来养育足够健康的牲畜。

4、研发团队水平怎样,为科研服务的品牌,如果没有高水准的研发人员,就谈不上质量提升。有专职研发团队和丰富的团队研发经验,更有质量保证。

如何使用使用胎牛血清?

1、将血清从冷冻箱取出后,先置于2-8℃冰箱12-24小时左右使之溶解,然后在室温下使之全溶。但必须注意的是,溶解过程中必须规则地摇晃均匀。

2、切勿将刚刚从-20℃冰箱里拿出来的血清直接放在水浴中,无论室温的水或者37℃的水,因为在水浴中血清迅速熔化,很大的温差(-20℃到37℃,温差为57℃)极其容易造成血清产生沉淀。

3、直接放65℃水浴中更是极其残忍的做法,是对血清的亵玩,对科学规则的粗暴践踏!

4、血清应该在-10 ℃以下保存。若一次无法用完一瓶,应该无菌分装,再冷冻保存。

 

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