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北京博奥龙:HPR标记试剂盒使用说明书​‍
时间:2019-06-10    浏览:   【 打印此页】  【 关闭


 一、 产品描述:

 

HRP标记试剂盒采用改良的碘氧化法活化辣根过氧化物酶(HRP),经过氧化以后活化的HRP可以与待标记物的游离氨基结合,发生希夫碱反应(Schiff's Base Reaction);HRP标记试剂盒适用于带有游离氨基的物质的标记,比如:带有游离氨基(伯胺)的小分子化合物,蛋白或抗体。

 

二、产品组成:

 

HRP 1支(冻干粉)、标记缓冲液1支、标记终止液(冻干粉)1支(使用前加水至1ml)、标记物保存液1支。

 

 

三、使用方法:

 

1、实验前准备:步骤一、 提前30min从冰箱中取出试剂盒,使试剂盒各组分平衡至室温;步骤二、准备标记物:待标记物以0.01M pH7.4 PBS为佳,不含有甘油、叠氮钠、氨基物质(包括甘氨酸、Tris等)、EDTA等物质。如果待标记抗体含有以上物质,需用0.01M pH7.4 PBS缓冲液进行充分透析或超滤管超滤,以除去以上物质,保证标记效率。调整待标记物的浓度至适当浓度,抗体调整到浓度0.5-5mg/ml;对于小分子物质,需要实验者摸索浓度,保证HRP的比例过量。如果不能确保HRP过量,标记完之后最好透析或过滤除去未标记的小分子物质。

 

2、标记反应:向待标物的溶液中加入1/10体积的标记反应液,用移液器反复吹打几次以充分混匀,避免产生气泡;将以上待标记溶液加到HRP管中,用移液器反复吹打几次以充分混匀,避免产生气泡,室温避光反应3hrs。

 

3、标记反应终止:将反应终止液干粉管中加入1mL 去离子水配成反应终止液,取适量的反应终止液加入步骤2的反应液中,比例为每10µl反应液加入1µl反应终止液。充分混匀,室温放1hr。

 

4、标记物产物收集与保存:终止完成后,加入等体积的标记物保存液,充分混匀,置于-20℃保存。

 

 

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