筛选融合细胞时为什么大多数细胞不死?
杂交瘤筛选时很多假阳性?
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HAT选择性培养基
次黄嘌呤(Hypoxantin, H)、氨基蝶呤(Aminopterin, A)和胸腺嘧啶脱氧核苷(Thymidin, T)。
❀ 氨基蝶呤(Aminopterin):作为一种二氢叶酸还原酶抑制剂,氨基蝶呤阻止了脱氧核糖核酸(DNA)的合成主途径,导致细胞不能利用这一路径合成必需的核苷酸。
❀ 次黄嘌呤和胸苷(H & T):提供了补救合成途径的底物,允许具备HGPRT和TK酶活性的细胞通过旁路合成途径来合成DNA。
HAT选择性培养基,是常用的骨髓杂交瘤细胞选择性培养基,用于筛选出B 细胞和HGPRT 缺陷型瘤细胞(HGPRT-)正确融合后的杂交瘤。这种HGPRT酶缺陷的瘤细胞,不能利用主要途径合成核酸,而在氨基蝶呤(二氢叶酸类似物)存在下,这种酶缺陷的瘤细胞也不能利用补救合成途径合成核酸,因此消除了瘤细胞以及瘤细胞自身融合形成的细胞。B 细胞或者B 细胞自身融合后,因不能无限增殖,在增殖数代后就会死亡。最终,只有B 细胞和瘤细胞的融合细胞能利用旁路合成而得以存活。
次黄嘌呤(Hypoxanthine)和胸腺嘧啶核苷(Thymidine)
HT添加剂用于杂交瘤的筛选培养基中,帮助维持已筛选出的杂交瘤细胞的生长,同时提供了必要的底物,确保残留的氨基蝶呤不会完全阻断DNA的合成。
❀ HT/HAT培养基添加剂为无菌液体,以50×的浓缩溶液供应,使用前应稀释至1×。将1体积的HT/HAT培养基添加剂(50×)稀释到49体积所需的细胞培养基中
★融合用培养基准备(假设铺10块板× 20ml/板,则需准备200ml HAT培养基):15%胎牛血清+10%(v/v)Hybridoma Feeder添加因子或饲养细胞+1×HAT或1×HT+1×双抗(链霉素+青霉素),1640不完全培养基补足。
❀ HT/HAT培养基添加剂为无菌液体,以50×的浓缩溶液供应,使用前应稀释至1×。将1体积的HT/HAT培养基添加剂(50×)稀释到49体积所需的细胞培养基中。
融合第24h
融合第7天
融合第13天
若本品有成分过饱和析出,摇匀后正常使用即可。摇匀后底部还是有一些沉淀,也是不影响使用。也可37度水浴助溶,大部分是可以重新溶解。
公司主要产品有抗体制备全套产品、病毒包装 相关产品、2万多种科研用抗原抗体、近300 种病理级抗体、几千种重组蛋白,另有WB、 IHC、ELISA、细胞培养相关试剂及诸多特色 产品和特色技术服务。