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常见问题
常见问题
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Q1:
实验室细胞房能使用吗?对实验室和实验人员有无伤害?
假病毒里没有任何的新冠核酸,仅仅是假病毒表面有S蛋白,没有复制性的,实验室细胞房可以使用,也没有致病性。我们说明书里写的相对比较保守。
Q2:
感染细胞的新冠假病毒可以感染小鼠么
我们的新冠假病毒,做过动物实验,效果不好,检测不到,不建议用于感染小鼠。
Q3:
PCR定量引物
ZsGreen-QPCR-F:ACGAGTCCAAGTTCTACGGC;ZsGreen-QPCR-R:CGGGGATGATCTTCTCGCAG
Q4:
可感染细胞的用量
96孔板每孔的可感染细胞假病毒用量2-10ul,假病毒浓度是1-10的7次方,1ul也就是10的4次方
Q5:
做中和实验,下降多少有效
这个很难定义,50-70%可以认为效果比较好
Q6:
滴度是多少
梯度稀释法,大于1*10的7次方。我们用的是梯度稀释法,是用一样数量的细胞,例如细胞数量都是1E+5,如果加了10ul病毒,细胞全部感染满了,那就是过度感染,如果加了1ul感染了百分之10,那就是1ul的病毒夜感染了1E+4个细胞,那么1ml就可以感染1E+7个细胞,差不多是这样算出来的
Q7:
4℃保存 保质期多久
短时间12小时内影响不大,时间长的话活性会降低甚至无法使用;-80度保存,避免多次冻融
Q8:
病毒粒径是多大
100-120纳米左右
Q9:
产品保存液成分
因为是病毒保存液的溶剂,病毒里面会有微量的血清、DMEM培养基的残留,还可能会有细胞的一些杂蛋白残留,这些都没法完全去除
Q10:
是否可以做IC50测定
是可以做的
Q11:
可以提供阳性对照吗?
可以提供阳性对照,已经配好,150元每份
Q12:
假病毒是可溶的蛋白还是颗粒状的?如果是颗粒状的加入到LB或者MSgg培养基是否会对它有影响?
假病毒是颗粒状的;没有测试其在LB或MSgg培养基中的影响
Q13:
可否用投射电镜拍到该假病毒形貌,可否提取核酸信息
病毒是颗粒状的,正常是能用投射电镜拍到形貌;病毒里的核酸序列除了S蛋白序列之外,都是假病毒的核酸序列,不是新冠病毒的核酸序列
Q14:
可感染细胞的假病毒目前情况
可感染细胞的假病毒目前主要由HIV骨架和VSV骨架两种,两种病毒都可以用于细胞实验和动物实验,VSV骨架假病毒做动物实验效率会略好一些。我们的假病毒是HIV骨架的。 HIV骨架假病毒三个质粒=慢病毒(HIV)的包装质粒+新冠S蛋白包膜外壳+载体质粒(含有GFp和荧光素酶)。 VSV骨架假病毒三个质粒=水泡性口炎病毒载体(VSV)的包装质粒+新冠S蛋白包膜外壳+载体质粒(含有GFp或荧光素酶)。 假病毒的动物实验:先用腺病毒让动物的部分组织或器官有ace2细胞的过表达,然后用可感染细胞的假病毒进行侵染实验。
Q15:
有感染活性的假病毒内的S基因的3.8k基因序列或引物序列是什么
只提供相关参考文献,序列不对外公布。
Q16:
荧光是单荧光还是双荧光
目前都是单荧光,萤火虫的。
Q17:
产品颜色
个别产品是偏粉红色,不影响使用。
Q18:
可感染细胞的假病毒是怎么构建的
是HIV骨架改造的,加了S蛋白包膜,载体质粒里有GFP和荧光素酶。常规慢病毒三个质粒=慢病毒的包装质粒+VSVG包膜外壳+载体质粒(含有目标基因);可感染细胞的假病毒三个质粒=慢病毒的包装质粒+新冠S蛋白包膜外壳+载体质粒(含有GFP和荧光素酶)。
Q19:
假病毒里的荧光素酶用什么试剂盒激活?
我们用promega 的。
Q20:
说明书中的mock 是什么
mock是空细胞。
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