内毒素去除套装 Endotoxin Removal Kit

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货号: BDTL0020-K

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产品货号 BDTL0020-K
别名内毒素去除套装 Endotoxin Removal Kit
产品名称内毒素去除套装 Endotoxin Removal Kit
类别抗体制备
用途内毒素除去试剂盒

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产品详情

1.产品介绍
内毒素去除层析介质是一种用于去除生物源蛋白类产品（包括多肽、抗体、多糖等）中内毒素的产品。它是将修饰过的多粘菌素B连接至4%琼脂糖微球上，特异性去除内毒素，可将样品中内毒素降低至0.1EU/ml，样品回收率高。具体性能见表1。

表1. Endotoxin Removal Beads产品性能

性能	指标
基质	4%琼脂糖微球
配体	修饰过的多粘菌素B
载量	>2,000,000EU/ml 介质
粒径 (μm)	45-165
最大流速	0.1 MPa, 1 bar
pH 稳定范围	5-10
可耐受试剂	20%DMSO,20%乙醇,20%甘油；1M尿素,300mM咪唑；0.05% Tween 20, 10mM DTT等
储存缓冲液	20% 乙醇
储存温度	2-8℃

试剂盒组分

名称	规格	数量
内毒素去除预装柱	1.5ml	1支
平衡液	125ml	1瓶
再生液	125ml	1瓶

2. 内毒素去除流程
2.1 Buffer的准备
所有用水和及耗材均需无热源产品，防止在使用过程中引入内毒素。
提供平衡液和再生液。再生液在室温下略带浑浊的液体，轻轻摇晃，如果发现有固体状物质存在，可以把再生液放置于2-8℃冰箱，或者置于冰上，间歇摇晃，直至呈均一、透明溶液。
注: 结合液和洗脱液可根据样品性质进行改变，建议pH7-8，NaCl约0.15M-0.5M。
2.2 样品准备

样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
样品PH最好控制在pH7-8，因为内毒素结合至柱子上的最佳pH为6-9。
样品最好控制适当的离子强度，减少非特异性吸附，如0.15-0.5M的NaCl。

2.3 内毒素去除

将Endotoxin Removal Beads的预装柱置于铁架台上，依次取下上盖和打开流速控制器，（注意：如果顺序反了，填料中会进入气泡）。将控速器开到最大，靠重力将保护液流干。
用无热原枪头加入5ml冷的再生液，控制流速在0.25ml/min，或每分钟小于10滴，流干后再重复两次，确保柱子中无内毒素。再生时建议控制温度2-8℃。
再生液流干后，用无热原枪头吸取6ml的平衡液，沿柱管内壁均匀加入，保证清洗柱管的内壁，调节流速为0.5ml/min，流干平衡液，再重复两次，平衡时建议控制温度2-8℃。
用无热原枪头吸取1.5ml样品加到平衡好的Endotoxin Removal Beads中，调节流速在0.25ml/min，或每分钟小于10滴，最初1.5ml空体积不接收。当样品流完，继续添加样品，并开始使用无热原容器收集流出液，即为除热原的样品。为了降低样品的损失，建议样品流完后，再添加1.5ml平衡液，并与之前的流出液合并。
检测样品中内毒素含量及样品回收率。
如果样品中内毒素含量仍高于目标值，继续重复上述操作。

3. 问题及解决方案

问题	原因分析	推荐解决方案
内毒素去除效率低	样品pH值不在内毒素结合范围内	用0.1MNaOH或0.1M HCl调节pH7-8
	样品与层析介质接触时间短	减少流速，增加样品接触时间
	去除或检测系统被内毒素污染	所有试验用品均需无热源产品
	内毒素与目的蛋白结合较强	优化样品pH，使样品与内毒素分离；增加接触时间
样品被污染	层析介质纯化过其他样品	不要用使用过的层析介质去除不同样品的内毒素
样品回收率低	样品非特异性吸附在层析介质上	增加样品和平衡液中的NaCl浓度
样品回收率低	目的蛋白与内毒素结合一起被去除	优化样品pH，使样品与内毒素分离；

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