产品基本信息

• 产品货号 BF06224
• 产品名称 慢病毒滴度ELISA检测试剂盒(一步法)
• 类别 细胞生物学
• 检测范围 HIV-1 P24 抗原浓度：5-160pg/ml
• 注意事项 1.     从冷藏环境取出的试剂盒内全部成份及待测标本应在室温平衡 30 分钟后方可使用。微孔 板为真空包装，打开后受潮易失效，未用完的用自封袋等排除空气密封保存，并在 3天内 使用；
  2.     洗涤液若出现结晶，可置37℃使之溶解后方可使用；
  3.     结果判定必须以酶标仪读数为准，建议使用双波长 450nm/630nm 检测，并在反应终止后1小时内完成；
  4.     终止液为混合型强酸，使用时必须注意安全；
  5.     加液时必须用加液器，并经常校对加液器的准确性；
  6.     洗涤时，若手动洗涤，各孔均需加300μl洗涤液，并振荡30-60秒；若洗板机洗涤则各孔均需 加满洗涤液，防止孔口内有游离酶存在。使用洗板机洗涤应设定30-60秒的浸泡时间；
  7.     操作应严格按说明书进行，不同批次试剂不得混用
• 用途 1、配液：将30 ml浓缩洗涤液（20倍）用蒸馏水稀释至600 ml；或取适量浓缩液按 需配制成1*洗涤液 本试剂盒采用ELISA 法可定性、定量检测HIV-1 P24蛋白，适用于血清、培养上清、样 品等中的慢病毒的滴度检测。检测范围为HIV-1 P24 抗原浓度：5-160pg/ml。仅限于实验 室研究。

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产品详情

试剂盒组成
 

微孔板	8孔×12
裂解液	4ml
阳性对照	0. 15ml
酶结合物	10ml
20×浓缩洗涤液	30ml
底物液	12ml
终止液	6ml

保存：2-8℃（避光），保质期 1 年


一、原理
本试剂盒采用双抗体夹心法测定 HIV-1 P24蛋白，即将抗HIV-1P24的单克隆抗体包被于 微孔板，待测样本加入已包被的反应孔内孵育，若标本中含有HIV-1P24蛋白，则该蛋白与孔 内的抗体形成抗原抗体复合物，加入酶标抗HIV-1P24单抗，孵育后，酶标抗体与抗原抗体复 合物上的抗原结合，再与底物反应显色。最后用终止液终止反应，用酶标仪测定 OD 值。

二、用途
本试剂盒采用ELISA 法可定性、定量检测HIV-1 P24蛋白，适用于细胞培养上清样品中的慢病毒的滴度检测。检测范围为HIV-1 P24 抗原浓度：5-160pg/ml。仅限于实验室研究。

三、使用方法
1 、配液：将30 ml浓缩洗涤液（20倍）用蒸馏水稀释至600 ml；或取适量浓缩液按 需配制成1*洗涤液。
2 、定量HIV-1 P24系列稀释： 阳性对照（PC）含有6.4 ng/ml的重组HIV-1 P24抗原，用完全DMEM或者1*洗涤液梯度系列稀释六个浓度的阳性对照（稀释方法见下表），每  个稀释浓度做两个复孔，并对应的*使用完全DMEM或者1*洗涤液稀释待测样本。

*注意：如果您使用完全DMEM稀释阳性对照就请用完全DMEM稀释待测样本；如果您使用1* 洗涤液稀释阳性对照就请用1*洗涤液稀释待测样本。
表1 定量 HIV-1 P24 系列稀释
HIV-1 P24抗原浓度（pg/ml）       管号     抗原（ ml）    稀释液（ ml）   
 

160 pg/ml	1#	0.01 ml PC	0.39ml
80 pg/ml	2#	0.2 ml 1#	0.2 ml
40 pg/ml	3#	0.2 ml 2#	0.2 ml
20 pg/ml	4#	0.2 ml 3#	0.2 ml
10 pg/ml	5#	0.2 ml 4#	0.2 ml
5 pg/ml	6#	0.2 ml 5#	0.2 ml

3 、编号：将样品对应孔按序编号，每板应设阴性对照共计四孔（建议四孔，最少两孔）、 阳性对照每个梯度各两孔。其中阴性对照即您步骤2中稀释待测样本及阳性对照的溶液，其中阳性对照即为表1中您梯度稀释的六管HIV-1 p24抗原。
4 、将25μl裂解液加入到反应孔中。
5 、将75μl待测样品或对照品加入到反应孔中。
6 、将75μl酶结合物加入到反应孔中。振荡30-60秒混匀，置37℃孵育50分钟。
7 、洗板5次，拍干后每孔加入单组分TMB底物100μl/孔。置37℃孵育10分钟。
8 、加入终止液50μl/孔，振荡30-60秒混匀，OD值在1h内能够稳定。
9 、用酶标仪读数，波长450nm(建议使用双波长酶标仪，参考波长630nm)。
四、结果判断

1 、阴性对照的正常范围：正常情况下，阴性对照OD值应≤0.05。
2 、阳性对照的正常范围：正常情况下定量测定160 pg/ml阳性对照OD值≥1.00
3 、临界值=阴性对照平均值+0.02；
4 、阳性定性判定：测试标本的OD值小于临界值则为阴性；测试标本的OD值大于或等于临 界值则为阳性。
5 、阳性定量判定：参照如下图表的方法，绘出标准曲线并进行定量判定。推荐使用直线回 归或者四参数曲线拟合。

表2. 阳性定量判定
管号      HIV-1 P24抗原浓度（pg/ml）             OD值              OD平均值

 

1#	160 pg/ml	2.693	2.582	2.6375
2#	80 pg/ml	1.248	1.267	1.2575
3#	40 pg/ml	0.615	0.624	0.6195
4#	20 pg/ml	0.327	0.319	0.323
5#	10 pg/ml	0.149	0.15	0.1495
6#	5 pg/ml                                   0.076               0.078			0.077

NC1=0.023   NC2=0.022   NC3=0.022  NC4=0.021   平均值NCx=0.022 Cut  off=0.022+0.02=0.042