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SP2/0细胞传代

时间 7/10/2025 7:21:11 PM

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作者 

视频的目的不在于固化操作流程

实验成功的路径从不唯一

希望以此为起始

助您发现万千可能

——致永不止步的科研探索者

 
1、准备

❶ 将水浴锅打开调整至37℃预热

❷ 在超净台中放入75cm²培养瓶或者面积相当的培养皿,打开超净台紫外,消杀30min;

❸ 水浴锅温度达到37℃后,将1640完全培养基、 胰酶放入预热

1640完全培养基:RPMI-1640基础培养基+10%FBS+1%青霉素-链霉素“双抗”+1%谷氨酰胺(Gln)

 

2待细胞生长至>70%成片时即可传代
 

3加入胰酶

彻底吸去培养基,加入1-2ml 0.25%胰酶(25cm²培养瓶)消化细胞,轻转培养瓶,使胰酶充分浸润培养瓶的整个底部,37℃消化5-10min。

备注:贴壁不牢的细胞也可尝试不用胰酶,直接用移液管吹打

 
 
4做好标注

消化期间标注好传代信息,向新的培养瓶中加入适量的1640完全培养基

视频中使用75cm²培养瓶,加入培养基20-25ml

5终止消化

从培养箱中取出消化好的细胞,用5.5ml 1640完全培养基终止消化,并轻轻吹散细胞。

6分瓶 传代

按1:5-1:10传代,分别加入到各培养瓶中,轻轻摇匀,在37℃/5%CO₂条件下培养

备注:需要通气培养,不透气瓶需将瓶盖拧松

7定期观察细胞
 
定期观察细胞,细胞生长状况可参考细胞复苏
 

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